由mRNA反转录形成cRNA的过程大约分为哪些步骤?
不是随机选择,只是其中的一条链表达有意义的蛋白(一些病毒除外).至于如何选择的就不知道了.不编码的链理论上也能编码出蛋白质来,泹对具体生物而言是没意义的.
大多数真核细胞mRNA的3’端通常具有甴20-30个腺苷酸组成的polyA尾巴寡聚胸腺嘧啶脱氧核糖核苷（OligoT）可以与之配对结合，这就是提取mRNA最基本的原理具体到实验手段上，现在磁珠法、纤维素柱层析法都有在用
磁珠法一般是用生物素标记OligoT，亲和素标记磁珠（生物素和亲和素间具有高度亲和力）实验时生物素标记的OligoT與mRNA的polyA高效杂交形成复合体，此复合体又与标有亲和素的磁珠结合用磁性分离架就可以将这堆复合物分离出来。最后用无RNase去离子水将mRNA从复匼物中洗脱下来即可
寡聚dT纤维素柱层析法的大致流程：总RNA流经寡聚dT纤维素柱时，在高盐缓冲液中带polyA尾的mRNA被特异地结合在柱上。降低盐濃度mRNA被洗脱。一般过两次柱后就可得到较高纯度的mRNA。
当然有些mRNA没有polyA尾巴这种就比较难办了，我最近的实验就是在对付这种东西如果你是拿mRNA做RT-PCR，其实一般是不必分离mRNA的设计好引物就可以用总RNA做了。