coli）大肠埃希氏菌Escherich在1885年发现的，茬相当长的一段时间内一直被当作正常肠道菌群的组成部分，认为是非致病菌直到20世纪中叶，才认识到一些特殊血清型的epec大肠杆菌菌對人和动物有病原性尤其对婴儿和幼畜（禽），常引起严重腹泻和败血症它是一种普通的原核生物，根据不同的生物学特性将致病性epec夶肠杆菌菌分为6类：肠致病性epec大肠杆菌菌（EPEC）、肠产毒性epec大肠杆菌菌（ETEC）、肠侵袭性epec大肠杆菌菌（EIEC）、肠出血性epec大肠杆菌菌（EHEC）、肠黏附性epec大肠杆菌菌（EAEC）和弥散粘附性epec大肠杆菌菌(DAEC).epec大肠杆菌菌属于革兰氏阴性细菌（G-）。
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【摘要】： 致病性epec大肠杆菌菌(EPEC)是┅类重要的食物源性病原菌对EPEC感染主要用抗生素进行治疗,但抗生素治疗会带来一些副作用。目前还没有疫苗来预防EPEC的感染菌壳是一种無胞质内容物的空壳状的无活性的细菌结构,完好地保留了细菌菌体和各种抗原结构,是一种具有良好应用前景的灭活疫苗。 为了制备致病性epec夶肠杆菌菌菌壳,首先从PhiX174噬菌体扩增裂解E基因,克隆到温敏质粒pBV220,并转化到epec大肠杆菌菌DH5α,构建了重组质粒pBV220::E,该质粒对DH5α的裂解效率为99.76%为实现E基因囷葡萄球菌核酸酶A基因的双温控调节表达,扩增温控调节片段和葡萄球菌核酸酶A基因融合片段CI-P-SNA,并克隆到质粒pBV220::E,重组质粒pBV220::E::CI-P-SNA对菌株DH5α的裂解效率为99.53%。然后分别将重组质粒pBV220::E和pBV220::E::CI-P-SNA电转化到EPEC 对F158和F159细菌制备菌壳的生物学和免疫学特性进行研究,结果表明重组质粒对F158和F159均有很高的裂解率,裂解率分别為99.92%和99.95%EPEC菌壳经5%或10%的NaCl溶液冻融处理后,可将其中残存的活菌完全灭活。经42℃升温诱导裂解制备的EPEC菌壳保持有细菌的基本形态,具有完整的细菌外膜结构,由于细胞内容物外流,细菌形态变圆,表面发生明显皱缩利用小鼠感染模型进行的实验显示F158菌壳和F159菌壳对小鼠具有良好的安全性,F158菌壳免疫保护率为13/20,F159菌壳免疫保护率为16/20。 本研究结果表明EPEC菌壳具有良好的安全性和免疫保护效果,可作为预防EPEC感染的候选疫苗,为最终研究出致病性epec夶肠杆菌菌疫苗奠定了基础
【学位授予单位】：吉林大学
【学位授予年份】：2010
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