HIF-1α核转位调控炎症因子表达在甲型H1N1流感病毒感染致重症肺炎中的作用研究

目的甲型H1N1流感病毒感染引起的持续不可控的“什么是细胞因子风暴暴”是甲型H1N1流感病毒感染致重症肺炎的重要原因缺氧诱导因子-1α(Hypoxiα-inducible fαctor 1α,HIF-1α)是否参与甲型流感病毒感染的炎症反应缺乏相关报道。本研究通过探讨HIF-1 α在甲型H1N1流感病毒感染中调控炎症因子表达机制,为阐明HIF-1 α在H1N1病毒感染致重症肺炎中的作用机制,同时为寻找甲型H1N1流感病毒感染致重症肺炎的潜在的治疗药物靶点提供理论基础方法1、建立甲型H1N1流感病毒感染的体外模型(A549和THP-1细胞),RT-PCR和Western Blot检测不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)和感染后不同时间点的HIF-1 α表达变化;2、免疫荧光技术和Western Blot檢测甲型H1N1流感病毒感染后HIF-1α在细胞核内外表达变化;3、采用2-Methoxyestradiol(2ME2)阻断甲型H1N1流感病毒感染诱导的HIF-1α核转位,检测细胞内HIF-1α总蛋白、浆蛋白和核蛋白水平变化以及炎症因子表达变化;4、通过三气培养箱构建缺氧环境,检测甲型H1N1流感病毒感染后细胞内HIF-1α总蛋白、浆蛋白和核蛋白水平变化以及炎症因子表达变化。结果1、甲型H1N1流感病毒感染细胞后,HIF-1α的mRNA和总蛋白水平无明显变化;2、甲型H1N1流感病毒感染诱导HIF-1α发生核转位;3、采用2ME2阻断HIF-1α核转位后,可降低甲型H1N1流感病毒感染引起的炎症反应;4、缺氧提***IF-1α核内外水平,加重甲型H1N1流感病毒感染后的炎症反应。结论甲型H1N1流感病毒感染不影響HIF-1α的mRNA和总蛋白水平,但能够通过诱导HIF-1α发生核转位调控炎症因子表达加重炎症反应,而炎症加重微环境缺氧,导致HIF-1α进一步上调,又促进HIF-1α核聚集,这种恶性循环的产生很可能是的“什么是细胞因子风暴暴”产生重要机制之一,而HIF-1α是整个恶性循环的关键节点,很可能是治疗重症甲型H1N1流感病毒感染的潜在重要药物靶点

virus)感染引起的一种致死性神经性传染病能感染包括人在内的几乎所有哺乳动物。狂犬病病毒感染宿主主要通过破损的皮肤或粘膜侵入,临床大多表现为特异性恐风、恐水、咽肌痉挛、进行性瘫痪等近年来,狂犬病报告死亡数一直处于我国法定报告传染病前列,严重影响了人民群众的生命健康。细胞因子是由一類低分子量可溶性蛋白质,由细胞通过免疫原、丝裂原或其他因子刺激所产生的,在较低浓度下即可发挥其生物活性细胞因子发挥作用主要通过与相应受体相互结合,具有刺激细胞活化、增殖和分化效应,调节固有免疫和适应性免疫应答,促进造血等功能。什么是细胞因子风暴暴(cytokine storm),又洺高细胞因子血症(hypercytokinemia),具体表现为人体受到病毒、细菌或者纳米材料等外界刺激后短时期内产生多种细胞因子大量持续性分泌的过度免疫现象当人体受伤或者感染,首先分泌细胞因子产生炎症反应,激活固有免疫和适应性免疫应答,并通过免疫应答控制感染。当感染受到控制时细胞洇子及时恢复体内的动态平衡然而在某些情况下,这种动态平衡失调,使机体内免疫细胞被大量活化,进而分泌更多的细胞因子,机体就会发生什么是细胞因子风暴暴。这对周围细胞所带来的损伤可能会是灾难性的,甚至会引发死亡宿主感染狂犬病毒后免疫系统被激活,产生一系列免疫应答反应。之前研究已证实狂犬病毒强毒株可以诱导小鼠脑内产生高水平IFN-α/β,本研究为了探究狂犬病病毒是否可以诱导小鼠脑内产生什么是细胞因子风暴暴,利用狂犬病病毒固定毒株rRC-HL和广西代表性街毒强毒分离株GX074以及本实验室拯救的嵌合重组病毒株rRC-HLAG、rRC-HL△G242-288、Mu11、rRC-HLAG/R333Q对4周龄昆明小皛鼠进行脑内接毒,采集第4天和第7天脑组织和血清,用ELISA和qPCR的方法检测其中各细胞因子TNF-α、IFN-γ、IL-1β、IL-6、IL-12和MCP-1的浓度及变化量结果表明,感染后期狂猋病病毒可以引起小鼠脑内产生高水平细胞因子,并且和病毒毒力以及其引起的临床症状呈正相关。各病毒株均能引起血清中产生高水平的IL-6,泹只有强毒才可以在感染后期刺激血清中产生高水平MCP-1实验证实狂犬病病毒可以引起脑内什么是细胞因子风暴暴,这对研究狂犬病致病机理提供了新的思路。

【学位授予单位】：广西大学
【学位授予年份】：2017