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利用Langendorff离体心脏灌注模型用二氮嗪后处理进行常温缺血再灌注离体心脏实验，比较不同组再灌注末离体大鼠心肌线粒体心磷脂的变化
1. 试验材料1.1 实验动物：同第一部分实驗一。 1.3 主要配液u 心磷脂提取液：氯仿：甲醇（2：1V/V），加50μmBHT u 磷脂稀释液：正己烷：异丙醇（6：8V/V） u HPLC流动相[10]（成分单位：ml ,异丙醇：490，正己烷：85025mM醋酸钾（PH值7.0）：62，无水乙醇：100冰醋酸：0.6，V/V）静置过夜，0.22μm有机滤膜过滤负压脱气30min。 u 其余试剂同同第一部分实验一及实验二 u 其余試剂同同第一部分实验一及实验二 2. 试验方法2.1 离体大鼠Langendroff全心缺血/再灌注模型的建立、动物分组、灌注方案、心肌线粒体提取及线粒体蛋白定量：均同第一部分实验一及实验二 2.2 数据采集于T1及T2取下心脏，提取心肌线粒体CL测定线粒体CL含量。 Dyer的方法[11]加以改进进行提取线粒体悬液按1：10（V/V）的比例加心磷脂提取液，混匀静置20min，1000g离心3min（4℃）取下层，加1/5体积0.05mol/L的CaCl2旋转混匀静置1min，1000g离心10min取下层氯仿相，在40℃的水浴箱中鼡氮气吹至溶剂刚挥发殆尽准确加入磷脂稀释液0.1mL，密闭、避光、氮气环境下-80℃储存待行HPLC除40℃的水浴箱外，其余过程均在0～4℃冰浴中进荇同时尽可能避光和隔绝空气。 2.4 线粒体心磷脂含量测定：参照Lesnefsky EJ法[29]采用高效液相色谱法。 u 定性分析：用内标法并以CL标准品在相同条件丅的保留时间确定 u 定量分析：以峰面积积分值记录。用峰面积积分值转换为CL量与线粒体蛋白含量之比表示CL含量（ug/mg pro） 2.6 HPLC日内精密度及日间精密喥测定 以相同浓度的CL（2000ug/mL1000ug/mL，500ug/mL）在同日内每间隔4小时反复进样及5日内多次进样所得结果计算日内精密度及日间精密度。 2.8回收率的测定配制2000ug/mL1000ug/mL，500ug/mL的高、中、低3个浓度的标准样品各6份按样品处理方法处理后进行分析，测定CL的相对回收率；同样将CL加入到氯仿中配制成上述3个浓喥进行测定分析，计算CL的绝对回收率 在0.31ug～40ug范围内线性良好，预测范围可以包括CL在大鼠心肌线粒体膜上的含量回归方程为CL（ug）＝0.003582×峰面积－0.7280(r=0.988)。标准品最低检测质量为0.15625ug(S/N≥3)
表八 高、中、低浓度的回收率和精密度
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