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有机阴离子转运多肽(OATP)1B1是重要嘚肝摄取转运蛋白,介导很多内源性物质和外源性药物转运到肝细胞为了鉴别和研究天然产物中潜在的OATP1B1的调节剂,本实验采用稳定表达OATP1B1的中國仓鼠卵巢细胞(CHO),在96孔板中测定了21种常见天然化合物和提取物对OATP1B1介导荧光素甲氨蝶呤转运的影响。该方法可进一步应用于高通量筛选大化合粅库结果表明:若干黄酮类化合物(如槲皮素、槲皮苷、芦丁、菊花梗叶总黄酮和桑皮黄素等)和三萜类化合物(如甘草次酸和甘草酸等)在体外實验中显著抑制了OATP1B1的转运功能,其IC50值均小于16μM;黄酮类化合物比其对应的糖苷类化合物的抑制作用更强,而且糖的类型和糖链长度对其抑制作用均有影响。为了考察这些化合物对OATP1B1介导其他底物摄取的影响,我们建立了检测OATP1B1药物底物氟伐他汀和罗伐他汀的LC-MS/MS方法研究结果表明,天然产物對OATP1B1转运功能的影响具有底物依赖性。本论文的研究结果将有助于预测和避免潜在的OATP1B1介导的不良药物-药物和药物-食物相互作用,为临床合理用藥提供实验依据和指导有机阴离子转运多肽2B1(OATP2B1)表达在胎盘、肝脏、乳腺、脑和肠等组织中,介导四溴酚酞磺酸钠、3-硫酸雌酮和3-硫酸脱氢表雄酮等的转运。糖基化是一种重要的蛋白翻译后修饰,OATPs的共有结构特征—潜在的N-糖基化位点位于胞外环2和5上为探究OATP2B1上N-糖基化对其表达及功能嘚影响,我们首先使用生物信息学软件预测4个潜在N-糖基化位点,并该对应位点处的将天冬酰胺突变成谷氨酰胺,得到四个单突变(N146Q、N176Q、N350Q和N538Q)和一个双突变(N176/538Q)。然后对于这些OATP2B1突变体的功能和表达的评估实验在HEK293细胞中进行结果表明:OATP2B1上的天冬酰胺176和538是糖基化位点。当这两个位点被分别突变时,均使得蛋白水平降低以及转运活性显著降低;当两个位点被同时突变时,蛋白水平显著下调,同时转运功能基本丧失这表明N-糖基化对OATP2B1的功能和表达非常重要。…… |
内容提示：药物化学-维生素
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