重庆医科大学附属儿童医院 儿研所干细胞实验室//儿童发育疾病研究教育部重点实验室//儿童发育重大疾病 2 3 国家国际科技合作基地//儿科学重庆市重点实验室胃肠新生儿外科，重庆 400014 ；濮阳市人民医院儿科河 南 濮阳 457000 摘要：目的探讨不同浓度全反式维甲酸（ATRA）对小鼠肝癌细胞Hepa 1-6成熟分化及细胞自噬水平的影响。方法 以小鼠肝癌 细胞Hepa 1-6 为研究对象分别给予0.1、1、10 μmol/L 浓度的ATRA 处理，荧光定量PCR 和Western blot 检测肝细胞相关标志基 因的表达吲哚菁绿（ICG）及过碘酸-希夫（PAS）染色检测小鼠肝癌细胞Hepa 1-6 的成熟功能，透射电镜观测细胞连接及自噬小 体选择最适的ATRA 作用浓度；Western blot 检测自噬相关标志蛋白的表达，ptfLC3 质粒转染细胞后共聚焦观察自噬流变化 检测自噬流是否通畅。结果 相较于空白对照组ATRA 可呈浓度依赖性抑制肝前体标志蛋白AFP 的表达，并促进肝細胞成熟 标志ALB、CK18、TAT 和ApoB 的表达ICG 及PAS 染色提示阳性细胞数明显增多；透射电镜结果显示ATRA 诱导组的紧密连接 和细胞骨架明显增多，可见高尔基复匼体以及较多的自噬小体和自噬溶酶体均以10 μmol/L 组最为显著，作为最适终浓度 自噬相关标志蛋白LC3-II、Beclin- 1、RAB7、P62 的表达不同程度增高，LC3- Ⅱ/LC3- Ⅰ的比徝明显增加（P<0.05）激光共聚焦可 见10 μmol/L ATRA 处理组细胞胞浆内绿色亮点的自噬小体及红色亮点的自噬溶酶体均较对照组明显增多。结论 ATRA 可诱 导小鼠肝癌细胞Hepa 1-6