2）受体菌lacZ突变（lacZ?M15） 3）载体lacZ’与?互補 4）?互补的插入失活 ④ IPTG的诱导作用 IPTG诱导的结果： （5）pUC系列载体的优点 3. pUC的衍生质粒载体 pGEM-3Z的特点： 5.2 ?噬菌体载体 ?噬菌体和其DNA 3. ?噬菌体的基因组特点 1）溶源化周期： 3） ?DNA的复制 模型 （2）滚环复制 5. ?噬菌体载体的构建 （3）人工构建的?噬菌体载体有两种类型： 选择标记: 2）?-半乳糖苷酶失活型载体： ② 替换型载体（substitution vectors) 1）? EMBL3 2）Charon40 （4）?载体的筛选标记 ?载体克隆策略 6. ?噬菌体的体外包装 （2）体外包装过程 （3）体外包装存在的问题： ③ 体外包装的容量限制： （4）?DNA载体的优点 5.2.2 cosmid载体（粘粒） 公司的T载体系列 pTarget vector 5.3.1 细菌人工染色体（BAC） 2. BAC的组成结构 2. 染色体复制和遗传的三个基本组件： 3. YAC的组成结构 （2）端粒（TEL） （4）克隆位点 （5）在酵母中的标记基因 5. YAC转化过程 6. YAC的缺点： 5.4 病毒载体 花椰菜花叶病病毒（CaMV）环状双链DNA分子的植物病毒 1. 基因：CaMV　DNA汾子大小：~8kb 2. 结构：在病毒颗粒中呈开环形式，负链有一缺口正链有两缺口。进入植物细胞后单链部分被酶解缺口自行闭合，成为环状DNA汾子 CaMV基因区 8个阅读框（ORF）和3个间隔区（IR1～3） IR1－ ORF VI与ORF VII之间 IR2－ ORF VII与ORF I之间 IR3－ ORF V与ORF VI之间 IR1 和IR3区各有一个启动子结构，分别启动同方向转录35S RNA和19S RNA而两者的终圵子都在IR1区。 35S启动子——组成型强启动子组装了35S启动子的外源基因可在植物细胞高效表达，在蓝藻细胞内也有效表达 CaMV的增殖和感染　 1、增殖途径： Ca MV颗粒→蚜虫→病毒DNA进入植物细胞核→ 转录19S RNA→翻译 35S RNA 　翻译 　　　 反转录 　　　　“-”链DNA →复制出“+”链 2、Ca MV-DNA可转染