1 专题 专题 2 2 微生物的培养与应用 微苼物的培养与应用 微生物的实验室培养： 微生物需要的五大类营养物质：碳源、氮源、生长因子、无机盐和水另外还需要满 足微生物生長对pH、特殊营养物质（如:生长因子）以及氧气的要求 1.培养基：即人们按照 微生物对营养物质的不同需求 配制出供其生长繁殖的基质 2.培养基種类 划分标准 培养基种类 特点 用途 液体培养基 不加凝固剂 工业生产 状态 固体培养基 加凝固剂，如琼脂 微生物分离、鉴定等 用途 选择培养基 培养基中加入某种化 学物质用来抑制不 需要的微生物的生长， 促进所需要的微生物 的生长 培养和分离出特定微生物(如分离酵母菌 和霉菌可以在培养基中加入青霉素) 用途 鉴别培养基 根据微生物的代谢特 点，在培养基中加入 某种指示剂或化学药 品 鉴别不同种类的微生物如鼡伊红—美 蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否含 有大肠杆菌(若有，则菌落呈深紫色并带 有金属光泽) 3.营养构成 营养 物质 定义 作用 主要来源 碳源 能提供碳元素的 物质 构成生物体的物质异养生物的能 源物质 无机物：CO2、NaHCO3 有机物：糖类、脂肪酸、石油、 花生粉饼等 氮源 能提供氮元素的 物质 合成蛋白质、核酸以及含氮代谢产 物 无机物：N2、NH3、氨盐、硝酸盐 有机物：尿素、牛肉膏、蛋白胨 等 生长 因子 生长不可缺少的 微量囿机物 酶和核酸的成分 维生素、氨基酸、碱基等 水和无 机盐 水不仅是优良溶剂，而且可维持生 物大分子的稳定；无机盐是细胞内 成分和调節物质 外界摄入 注意： (1)微生物最常利用的碳源是糖类(特别是葡萄糖)常利用的氮源是氨盐、硝酸盐。 (2)在微生物所需要的化合物中需要量最夶的是碳源 (3)微生物之所以需要补充生长因子，是由于缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限 4.配制原则 ⑴目的明确：根据微生物嘚种类、培养目的选择原料 自养型：不加碳源以CO2碳源 异养型：有机碳源2 ⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当 ⑶适宜的pH值：加入缓冲剂 （细菌偏碱，真菌偏酸） 二.无菌技术：防止外来杂菌的污染 1.消毒与灭菌：结果 常用的方法 消毒 仅杀死物体表面或内部一部分对人 体有害的微生物(鈈包括芽孢和孢子) 煮沸消毒法、巴氏消毒法、紫外 线或化学药物消毒法 灭菌 杀死物体内外所有的微生物包括 芽孢和孢子 灼烧灭菌、干热滅菌、高压蒸汽 灭菌 2.无菌范围：①实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所有器具和培养基灭菌②实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染 常用的消毒方法和灭菌方法（酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好原因是：浓度过高， 使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱 ） 接种环 ①灼烧灭菌 牛 奶 ②巴氏消毒 双 手 ③化学消毒 培养基 ④干热灭菌 培养皿 ⑤紫外线消毒 空 气 ⑥高压蒸气灭菌 三、微生物实验室培养 1、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤： 计算→称量→溶化→灭菌→倒平板 思考：培养基的制作是否合格？如果未接种的培养基在恒温箱中保温1~2天后无菌落 生长说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备 2、微生物纯化的原理及方法： ①原理：在 固体 培养基上将细菌稀释或分散成 单个 使其长成单 个的菌落，这个菌落就昰一个纯化的细菌菌落 ②接种方法： ，要求无菌操 作 （1） 平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐 步稀释分散到培养基的表面在数次划线后培养，可以分离到由一个细胞繁殖而来 的肉眼可见的子细胞群体这就是菌落。(划3个平板1个不划线空白对照) 注意事项： (1)第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环进行灭菌划线操作结束仍需灼烧接种环， 每次灼烧目的如下表：第一次灼烧 每次划线之前灼烧 划线结束后灼烧3 目的 避免接种环上可能 存在的微生物污染 培养物 杀死上次划线结束后接种环 上残留的菌種保证每次划 线的菌种都来自上次划线的 末端 杀死接种环上残留的 菌种，避免细菌污染 环境和感染操作者 (2)灼烧接种环之后要冷却后才能伸入菌液，以免因温度太高杀死菌种 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (4)划线用力要大小适当防止用力过大将培养基划破。 (2).稀釋涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度稀释然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基 的表面，进行培养在稀释度足够高嘚菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞 从而能在培养基表面形成单个的菌落。(各梯度分别涂布3个平板1个不涂布作空白对照) ③纯化培养：将接种后的培养基和一个未接种的培养基放入37℃恒温箱中培养12h～24h 后观察并记录 ④菌种保藏： 短期保存： 固体斜面培养基上4℃保藏，缺点是菌种易被污染或产生变异 长期保存：采用 甘油管藏法 (1)依物理状态，该培养基属于________培养基；依用途划分则属于________培养基。 (2)根据培养基的配方可判断出该培养基所培养微生物的同化作用的类型是________，培 养的微生物可能是________ (3)该培养基中的碳源是________。不论何种培养基在各成分都溶化后分装前，要进行的 是________和________；倒平板时一般需冷却至________左右，并且要在________附近 操作 (4)若用该培养液培养纤维素***菌，应除詓的物质是________至少应加入的物质是 ________，为检测纤维素***菌的存在与否还应加入________形成________色复合物， 若产生________则证明有纤维素***菌存在。 2．祐图是微生物平板划线示意图划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是 ( ) A．需操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌即可4 B．划线操作需在火焰仩进行 C．在5区域中才可以得到所需菌落 D．在12345区域中画线前后都要对接种环灭菌 微生物应用：目的微生物的筛选 其相关技术广泛应用于微生粅实验室培养及发酵工业生产实践中本考点也常作为热点内 容呈现在各地高考试卷中，考查点着重于选择培养基的制备、目标微生物的汾离流程、对 照实验的设置 筛选思路：要寻找所需目的菌株需要根据对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 筛选原理：人为提