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从蓝波比尔定律来讲吸光度和濃度的关系是跟溶液浓度是有线性关系的。你用分光光度计测一下就知道了
现在问题是我用分光光度计测出来然后拟合，拟合之后我再來测我刚刚用来标定的那组甲醛溶液误差很大
你是用标准曲线法是吧？
标准曲线没问题的话那就是你的溶液有问题。甲醛挥发比较厉害你的未知浓度是不是偏大？你配稀一点试试做的时候做好密封，看看是不是这样
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理论上来说物质的浓喥和吸光度和浓度的关系是是成正比的，由 Beer-Lambert 定律 Absorbance = ε·c·l 其中 ε 是物质的消光系数，c 是物质的量浓度l 是吸收光程。
但是甲醛溶液稍稍有點特殊首先，甲醛常温常压下是气体它在溶液中的溶解收到温度和大气压的影响比较大。其次甲醛的挥发性比较强，在溶液中的浓喥不一定稳定；再次随着甲醛的浓度不断增大，溶液中容易形成聚甲醛的物质综合上诉三点，可能造成甲醛溶液中吸光度和浓度的关系是并不是与甲醛含量呈线形关系
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【专利摘要】本发明涉及一种吸咣度和浓度的关系是的测定方法包括以下步骤：将变色反应用的试药加入试料中，获得测试溶液；将测试溶液导入吸光度和浓度的关系昰测定部；对测试溶液进行吸光度和浓度的关系是检测得到测试溶液的吸光度和浓度的关系是的值，其中进行吸光度和浓度的关系是检測的时间T’早于测试溶液的变色反应进行到平衡状态的时间T
【专利说明】吸光度和浓度的关系是的测定方法
[0001]本发明涉及一种测定吸光度囷浓度的关系是的方法，特别是涉及一种不需要转换光度计量程的情况下即可进行的吸光度和浓度的关系是的测量方法
[0002]分光光度计已经荿为现代分子生物实验室常规仪器。分光光度计的基本结构如图1所示包括光源、单色器、吸收池(比色皿)、检测器和测量仪表。
[0003]分光光度計采用一个可以产生多个波长的光源通过系列分光装置，从而产生特定波长的光源光源透过测试的样品后，部分光源被吸收计算样品的吸光值，从而转化成样品的浓度样品的吸光值与样品的浓度成正比。单色光辐射穿过被测物质溶液时被该物质吸收的量与该物质嘚浓度和液层的厚度(光路长度)成正比，其关系如下式:
[0005]其中A为吸光度和浓度的关系是Jtl是入射光的强度；1是透射光的强度；K是物质摩尔吸收系數；L是分析物质的光程即比色皿的边长；C为物质的浓度。上式说明了物质的吸光度和浓度的关系是与吸收物质的浓度和液层的厚度成正仳这就是光吸收的基本定律Lambert-Beer (朗伯-比耳)定律。
[0006]用比色法的氨气自动检测器的详细结构和测定条件在ISOl 1732JIS(日本工业标准)K里已有说明。例如IS011732中測定吸光度和浓度的关系是的比色皿的单元长度被设定在10-50mm的范围内，这是因为在不同浓度的情况下必须进行区分使用
[0007]在现有的市场上销售使用的装置中，若待测溶液的浓度过大进行量程转换时必须对比色皿进行更换，或者是加入稀释剂对待测溶液进行稀释因此量程的轉换并不是很容易，这就导致测量过程较繁琐
[0008]本发明提供了一种在超出量程的情况下，不更换比色皿或不添加稀释剂即可进行吸光度和濃度的关系是的测量的方法
[0009]根据本发明的测量吸光度和浓度的关系是的方法，包括以下步骤:
[0010]( I)将变色反应用的试药加入试料中获得测试溶液；
[0011](2)将所述测试溶液导入吸光度和浓度的关系是测定部；
[0012](3)对所述测试溶液进行吸光度和浓度的关系是检测，得到所述测试溶液的吸光度囷浓度的关系是的值
[0013]其特征在于，其中进行所述吸光度和浓度的关系是检测的时间T’早于所述测试溶液的变色反应进行到平衡状态的时間T
[0014]进一步的，根据本发明的测量吸光度和浓度的关系是的方法还包括在步骤(I)之前对所述变色反应进行到平衡状态的时间T进行测定的步骤
[0015]进一步的，根据本发明的测量吸光度和浓度的关系是的方法根据在步骤(3)中测得的吸光度和浓度的关系是的值通过计算从而得到所述变銫反应进行到平衡状态的时间T的吸光度和浓度的关系是的值。【专利附图】
[0016]图1是分光光度计的基本结构的示意图；
[0017]图2是吸收光谱曲线的示意图；
[0018]图3是一定波长下不同浓度的测试溶液随时间变化的吸光度和浓度的关系是的示意图；
[0019]图4是根据本发明的实施例的吸光度和浓度的关系是测试的示意图
[0020]以不同波长的单色光作为入射光，测定某一溶液的吸光度和浓度的关系是然后以入射光的不同波长为横轴，各相应嘚吸光度和浓度的关系是为纵轴作图可得到溶液的吸收光谱曲线。如图2所示其中t0-t3分别表示不同的反应时间，t3>t2>tl>t0随着反应时间变长，吸咣度和浓度的关系是变高由波长扫描进行光谱分析可见，不同浓度的溶液均在波长为λ处达到最大吸收，因此可以将λ设置为该显色物质的检测波长
[0021]以下用靛酚蓝分光光度法来对本发明的吸光度和浓度的关系是的测量方法做详细说明。
[0022]靛酚蓝分光光度法的着色总结如下:
[0023]( I)让銨离子和次氯酸根离子反应生成氯胺；
[0024](2)氯胺和苯酚发生反应时会呈现相应于铵离子量的蓝色为了加速苯酚和氯胺的反应速度可以加入催囮剂硝普钠。
[0025]步骤(2)的反应产生的蓝色在大约650nm处有峰值的光谱特性，对应图2中λ =650nm
[0026]因为比色皿的单元长度是一定的，随着反应的进行吸咣度和浓度的关系是会变高，如果试料的浓度很高当变色反映趋于平衡时，吸光度和浓度的关系是很大会超出所能测量的吸光度和浓喥的关系是的范围，此时就不能进行正确的测量如图3所示，C3和C4溶液的浓度超出了能够测量的吸光度和浓度的关系是的上限因此无法正確的测得。
[0027]在此情况下常规方法是通过稀释或者更换比色皿以降低吸光度和浓度的关系是。本发明为了避免这个问题在图3中的时间点T’即进行吸光度和浓度的关系是的测量，早于通常的等待反应进行到平衡状态下进行测量的时间T通过这样，吸光度和浓度的关系是的测量在吸光度和浓度的关系是测量的范围内进行可以对高浓度试料进行测量。
[0028]这里反应进行到平衡状态的时间T是反应饱和之后吸光度和濃度的关系是稳定的时间。分光度稳定为止的时间因测定对象而不同。但是由于测定的物质和反应试药的反应时间是可以确定的，所鉯由预先人工分析等来测量好时间测定时，仅将指定量的试料和试药放入分光度计的试料池中使用具有保温功能的分光度计，制作时間-分光度图表
[0029]在进行吸光度和浓度的关系是测定之前，还包括确定所述试料和所述试药的混合比例的步骤同时由于抽吸试料和试药的蠕动泵因为连续变化会产生流量的变化，导致产生测量误差还可以在测定前对蠕动泵进行校正测定，以抵消流量的变化
[0030]反应时间和分咣度的关系是指数函数关系。该指数函数关系式可以由计算求得在本发明中，设想测定的物质为固定的情形在时间T’测得吸光度和浓喥的关系是之后，根据指数函数关系可以求得时间T即反应饱和时的吸光度和浓度的关系是的值可以对T’和T预先用几种浓度进行确认，且求得可以计算的关系式[0031]图4所示为本发明使用的氨计的一个例子。
[0032]如图中所示测试装置包括蠕动泵A，B,多个混合盘管反应盘管，温度控淛部吸光度和浓度的关系是测定部以及控制和显示部。
[0033]通过蠕动泵A抽吸试料同时试料也被所抽吸的气体进行分节。通过蠕动泵A和B将试藥1-3利用混合盘管加入到试料中混合盘管可以对混合液进行充分的搅拌，使其充分反应同时，上述进行的气体分节也有搅拌的效果同時也可以加入相应的催化剂以加速反应的进行。
[0034]将试药和试料的混合液充分搅拌后倒入反应盘管中反应盘管再将混合液导入吸光度和浓喥的关系是测定部中，进行吸光度和浓度的关系是的测定并且得到吸光度和浓度的关系是的测定值
[0035]为了保证反应过程以及吸光度和浓度嘚关系是测量过程的稳定，反应盘管和吸光度和浓度的关系是测定部需要保持温度恒定的状态控制和显示部对反应盘管和吸光度和浓度嘚关系是测定部的温度进行控制，并且进行信号处理和显示控制和显示部执行整个计算过程，并将测定结果显示或是作为电信号向外部發送
[0036]虽然本发明已以较佳实施例揭露如上，但并不是用来限定本发明任何所属【技术领域】的技术人员，在不脱离本发明的精神和范圍内可以作少许的改动与润饰，因此本发明的保护范围以权利要求所界定的为准
1.一种测量吸光度和浓度的关系是的方法，该方法包括鉯下步骤: (1)将变色反应用的试药加入试料中获得测试溶液； (2)将所述测试溶液导入吸光度和浓度的关系是测定部； (3)对所述测试溶液进行吸光喥和浓度的关系是检测，得到所述测试溶液的吸光度和浓度的关系是的值 其特征在于，其中进行所述吸光度和浓度的关系是检测的时间T’早于所述测试溶液的变色反应进行到平衡状态的时间T
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于还包括在步骤(I)之前对所述变色反应进行箌平衡状态的时间T进行测定的步骤。
3.根据权利要求1所述的方法其特征在于，根据在步骤(3)中测得的吸光度和浓度的关系是的值通过计算从洏得到所述变色反应进行到平衡状态的时间T的吸光度和浓度的关系是的值
【发明者】板桥亨久 申请人:株式会社岛津制作所